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1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,醫(yī)學(xué)PPT,*,第九章 核酸類藥物的分析,1,醫(yī)學(xué)PPT,基本要求,掌握：,核酸的結(jié)構(gòu)和分類；嘌呤類藥物和嘧啶類藥物鑒別、檢查、含量測定的原理,熟悉：,核酸的理化性質(zhì)；反義寡核苷酸藥物鑒別、檢查、含量測定的原理,2,醫(yī)學(xué)PPT,第一節(jié) 概述,結(jié)構(gòu)和分類,理化性質(zhì),3,醫(yī)學(xué)PPT,什么是核酸？,1869,年核酸最早分離自外科繃帶膿細(xì)胞的,細(xì)胞核,，當(dāng)時(shí)發(fā)現(xiàn)這種物質(zhì)含磷量之高超過當(dāng)時(shí)發(fā)現(xiàn)的任何一種有機(jī)物，并且,含有很強(qiáng)的酸性,，故得名核酸。,1909,年其組成被研究清楚，,1944,年生物功能初步澄清，在,X,射線
2、衍射技術(shù)支持下,1953,年結(jié)構(gòu)澄清。,核酸是脫氧核糖核酸（,DNA,）與核糖核酸（,RNA,）的通稱,。,4,醫(yī)學(xué)PPT,核酸,核苷酸,磷酸,核苷,戊糖,堿基,水,解,一、結(jié)構(gòu)和分類,5,醫(yī)學(xué)PPT,核 酸,代表,戊糖,，對,DNA,而言為,脫氧核糖,，對,RNA,而言為,核糖,；,代表,堿基,代表,磷酸基,核苷酸,6,醫(yī)學(xué)PPT,核苷酸,磷酸,堿基,戊糖,7,醫(yī)學(xué)PPT,H,2,O,H,2,O,堿基,磷酸,戊糖,糖苷鍵,酯鍵,8,醫(yī)學(xué)PPT,核苷酸,堿基連接（糖苷鍵）,酯,鍵,（對,DNA,為,H,）,1,2,3,4,5,9,醫(yī)學(xué)PPT,戊糖,核糖,(in RNA),2,脫氧核糖,(in
3、DNA),10,醫(yī)學(xué)PPT,核苷,11,醫(yī)學(xué)PPT,DNA & RNA,12,醫(yī)學(xué)PPT,堿基,RNA,DNA,嘧啶環(huán),嘌呤環(huán),尿嘧啶,U,胸腺嘧啶,T,胞嘧啶,C,鳥嘌呤,G,腺嘌呤,A,13,醫(yī)學(xué)PPT,類別,DNA,RNA,基本單位,脫氧核糖核苷酸,核糖核苷酸,核苷酸,腺嘌呤脫氧核苷酸 鳥嘌呤脫氧核苷酸 胞嘧啶脫氧核苷酸 胸腺嘧啶脫氧核苷酸,腺嘌呤核苷酸 鳥嘌呤核苷酸 胞嘧啶核苷酸 尿嘧啶核苷酸,堿基,腺嘌呤（,A),鳥嘌呤（,G),胞嘧啶（,C),胸腺嘧啶（,T),腺嘌呤（,A),鳥嘌呤（,G),胞嘧啶（,C),尿嘧啶（,U,）,五碳糖,脫氧核糖,核糖,酸,磷酸,磷酸,14,醫(yī)學(xué)PPT
4、,稀有堿基,嘌呤,次黃嘌呤、,1-,甲基次黃嘌呤、,N,2,、,N,2,-,二甲基鳥嘌呤。,嘧啶,5-,甲基胞嘧啶、,5-,羥甲基胞嘧啶、二氫尿嘧啶、,4-,巰尿嘧啶,都是基本堿基的,化學(xué)修飾型,。,15,醫(yī)學(xué)PPT,鳥嘌呤,次黃嘌呤,1-,甲基次黃嘌呤,16,醫(yī)學(xué)PPT,二、理化性質(zhì),（一）兩性性質(zhì)：,磷酸基；堿基（通常：酸性）,pH,影響堿基間氫鍵穩(wěn)定：,DNA pH4.011.0,（二）水解性：,微溶于水，不溶于一般的有機(jī)溶劑,（三）,UV,：,max=260nm,蛋白質(zhì),280nm,A,260,/A,280,純,DNA,1.8,純,RNA,應(yīng)達(dá)到,2.0,混有雜蛋白 比值降低,17,醫(yī)
5、學(xué)PPT,18,醫(yī)學(xué)PPT,（四）變性和復(fù)性,1.,變性：,在某些理化因素影響下，,DNA,雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂和堿基堆積力破壞，有規(guī)律的雙螺旋結(jié)構(gòu)變成單鏈無規(guī)律的,“,線團(tuán),”,，但不發(fā)生共價(jià)鍵的斷裂，這過程稱之。,變性原因：高溫（一般,75,）、強(qiáng)氧化劑、強(qiáng)酸、堿、尿素等；,機(jī)理：,雙鏈間氫鍵斷開，成為兩條單鏈（,DNA,雙螺旋二級結(jié)構(gòu)的破壞，生物活性的喪失）,特征性,Tm-DNA,的變性溫度,8295,19,醫(yī)學(xué)PPT,20,醫(yī)學(xué)PPT,2.,復(fù)性,一定條件下，去除變性因素后，核酸,恢復(fù)二級結(jié)構(gòu)及生物活性的現(xiàn)象,；通常使用,熱復(fù)性,。（退火）,高溫變性,緩慢冷卻,熱復(fù)性,急速冷卻,復(fù)性失敗
6、,熱復(fù)性在基因測序中被廣泛應(yīng)用,21,醫(yī)學(xué)PPT,22,醫(yī)學(xué)PPT,（五）顏色反應(yīng),苔黑酚反應(yīng),:,RNA,中核糖,+,濃,HCl,（濃,H,2,SO,4,）糠醛,+,苔黑酚,深綠色化合物（,max=670nm,）,二苯胺反應(yīng),:,DNA,中脫氧核糖,+,濃,H,2,SO,4,5-,羥基,-4-,羰基戊醛,+,二苯胺藍(lán)色化合物（,max=595nm,）,水解后磷酸：,磷酸,+,鉬酸,磷鉬酸,+,還原劑（維生素,C,、氯化亞錫等） 鉬藍(lán)（,max=660nm,）,Fe,3+,脫水,23,醫(yī)學(xué)PPT,第二節(jié) 嘌呤類核苷酸藥物分析,嘌呤堿（腺嘌呤、鳥嘌呤）,戊糖,磷酸,24,醫(yī)學(xué)PPT,一、鑒別,戊
7、糖鑒別,嘌呤鑒別,磷酸鑒別,特征吸收光譜,熔點(diǎn)測定,25,醫(yī)學(xué)PPT,（一）戊糖的鑒別,苔黑酚反應(yīng),（地衣酚反應(yīng)）,-,凡核糖均有此反應(yīng),試劑：濃鹽酸，苔黑酚試劑，三氯化鐵（催化劑,）,現(xiàn)象：鮮綠色,二苯胺反應(yīng),DNA,試劑：濃硫酸，二苯胺,現(xiàn)象：藍(lán)色,與間苯三酚反應(yīng)（核苷酸中的戊糖）,現(xiàn)象：玫瑰紅色,26,醫(yī)學(xué)PPT,（二）嘌呤的鑒別,+,氨制硝酸銀白色紅棕色（遇光）,（嘌呤堿基的特殊鑒別反應(yīng)）,27,醫(yī)學(xué)PPT,（三）磷酸的鑒別,有機(jī)磷無機(jī)磷,+,鉬酸磷鉬酸,+,還原劑鉬藍(lán),28,醫(yī)學(xué)PPT,（四）特征吸收光譜,UV,：嘌呤環(huán)，嘧啶環(huán),IR,29,醫(yī)學(xué)PPT,（五）熔點(diǎn)測定,30,醫(yī)學(xué)PP
8、T,二、檢查,一般檢查,酸度，水分，無機(jī)鹽，有機(jī)物，溶液的顏色和澄清度,蛋白質(zhì)檢查,磺基水楊酸溶液,有關(guān)物質(zhì),紙色譜，薄層色譜，電泳，熒光檢查,31,醫(yī)學(xué)PPT,三、含量測定,紫外,-,可見分光光度法,現(xiàn)在國家已經(jīng)批準(zhǔn)的,嘌呤類核苷酸藥物,一般都用,此法測定含量,HPLC,32,醫(yī)學(xué)PPT,四、實(shí)例分析,肌苷,ATP,33,醫(yī)學(xué)PPT,（一）肌苷的質(zhì)量分析,1.,結(jié)構(gòu)：,C,10,H,12,N,4,O,5,268.23,本品為,9-D-,核糖次黃嘌呤。按干燥品計(jì)算，含,C,10,H1,2,N,4,O,5,應(yīng)為,98.0,102.0,。,2.,性狀：,本品為白色結(jié)晶性粉末；無臭，味微苦。,本品在
9、水中略溶，在氯仿或乙醇中不溶，在稀鹽,酸和氫氧化鈉溶液中易溶。,34,醫(yī)學(xué)PPT,3.,鑒別,取,0.01,供試品溶液適量,加等體積的,3,5-,二羥基甲苯溶液,(,取,3,，,5-,二羥基甲苯與三氯化鐵各,0.1g,，加鹽酸使成,100ml),，混勻，在水浴中加熱約,10,分鐘，即顯,綠色。,-,苔黑酚反應(yīng),取本品,1,水溶液，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，即產(chǎn)生,白色膠狀,沉淀。,-,嘌呤堿基,取含量測定項(xiàng)下的溶液,照分光光度法測定，在,248nm,的波長處有最大吸收，在,222nm,的波長處有最小吸收。,色譜圖,IR,35,醫(yī)學(xué)PPT,4.,檢查,溶液的澄清度與顏色（溶液的透光率）,取本品,0.
10、5g,，加水,50ml,使溶解，照分光光度法在,430nm,的波長處測定透光率，不得低于,98.0,(,供注射用,),。,干燥失重,取本品，在,105,干燥至恒重，減失重量不得過,1.0,熾灼殘?jiān)?不得過,0.1,(,供注射用,),或不得過,0.2,(,供口服用,重金屬,取本品,1.0g,，依法檢查含重金屬不得過百萬分之十。,次黃嘌呤,精密稱取本品,0.5g,，置,50ml,量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，照紙色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶,10l,，點(diǎn)于,325cm,色譜濾紙上，照上行法，以水為展開劑，展開約,20cm,處，取出晾干，置紫外光燈,(254nm),下檢視，不得出現(xiàn)雜質(zhì)斑點(diǎn)。,HPL
11、C,36,醫(yī)學(xué)PPT,5.,含量測定,1,）,UV,法：,取本品，精密稱定，加水制成每,1ml,中約含,10g,的溶液，照分光光度法在,248nm,的波長處測定吸收度，按,C,10,H,12,N,4,O,5,的吸收系數(shù)（,E,1,1cm,）為,460,計(jì)算。,2,）,HPLC,37,醫(yī)學(xué)PPT,6.,作用與用途,輔酶類藥。有改善機(jī)體代謝作用。用于各種類型肝臟疾患、心臟疾患、白細(xì)胞減少癥、血小板減少癥、中心視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)萎縮等。,7.,用法與用量,口服，一次,0.2,0.6g,一日,0.6,1.8g,8.,貯藏,遮光，密閉保存。,9.,制劑,(1),肌苷口服溶液,(2),肌苷片,(3),肌苷注
12、射液,(4),肌苷膠囊,(5),肌苷顆粒劑,38,醫(yī)學(xué)PPT,（二）三磷酸腺苷二鈉（,ATP,）的質(zhì)量分析,拼音名：,Sanlinsuanxiangan,erna,英文名：,Adenosine Disodium Triphosphate C,10,H,14,N,5,Na,2,O,13,P,3,551.15,1.,結(jié)構(gòu)：,本品為腺嘌呤核苷,-5,-,三磷酸酯二鈉鹽三水化合物。按干燥品計(jì)算，含,C,10,H,14,N,5,Na,2,O,13,P,3,不得少于,90.0,。,39,醫(yī)學(xué)PPT,2.,性狀：,本品為白色或類白色粉末或結(jié)晶塊狀物；無臭，味咸；有引濕性。 本品在水中易溶，在乙醇、氯仿或乙醚
13、中幾乎不溶。,40,醫(yī)學(xué)PPT,3.,鑒別,（,1,）取本品,20mg,加稀硝酸,2ml,溶解后，加鉬酸銨試液,1ml,，加熱，放冷，即析出黃色沉淀。,-,磷酸鹽,（,2,）取本品約,10mg,，加鹽酸溶液,(12)5ml,溶解后，加,間苯三酚,10mg,，混勻，置水浴中加熱約,1,分鐘，即顯玫瑰紅色。,-,戊糖,（,3,）苔黑酚反應(yīng),戊糖,（,3,）,UV,（,4,）,IR,（,5,）本品的水溶液顯鈉鹽的鑒別反應(yīng),41,醫(yī)學(xué)PPT,4.,檢查,酸度,溶液的澄清度與顏色,蛋白質(zhì),取本品,20mg,，加水,2ml,溶解后，滴加,30,磺基水楊酸,溶液,0.5ml,，不得發(fā)生渾濁。,有關(guān)物質(zhì),水分
14、,氯化物,鐵鹽,重金屬,熱原,42,醫(yī)學(xué)PPT,5.,含量測定,（,1,）總核苷酸：,UV,（,2,）三磷酸腺苷二鈉的重量比：,HPLC,（,3,）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn),（,4,）測定法,43,醫(yī)學(xué)PPT,6.,作用與用途,輔酶類藥。用于進(jìn)行性肌萎縮、腦溢血后遺癥、心功能不全、心肌疾患及肝炎等。,7.,注意,緩慢注射。心肌硬塞和腦溢血在發(fā)病期患者慎用。,8.,貯藏,有陰涼干燥處密封保存。有效期年。,9.,制劑,(1),三磷酸腺苷二鈉注射液,(2),注射用三磷酸腺苷二鈉,44,醫(yī)學(xué)PPT,第三節(jié) 嘧啶類核苷酸藥物的分析,45,醫(yī)學(xué)PPT,一、鑒別,該類藥物的化學(xué)組成和性質(zhì)本與嘌呤類,相似，唯
15、一區(qū)別在于堿基的不同。,一元堿,46,醫(yī)學(xué)PPT,二、檢查,常規(guī)檢查,其他核苷酸：,TLC,47,醫(yī)學(xué)PPT,三、含量測定,UV,法,電位滴定法,48,醫(yī)學(xué)PPT,四、實(shí)例分析,-,氟尿嘧啶,1.,通用名,:,氟尿嘧啶,化學(xué)名,: 5-,氟,-2,4(1H,3H)-,嘧啶二酮,分子式,: C,4,H,3,FN,2,O,2,分子量,: 130.08,熔 點(diǎn),: 278-286,水溶性,: 12.2g/L 20,含氟尿嘧啶（,C4H3FN202,）應(yīng)為標(biāo)示量的,93.0-107.0%,49,醫(yī)學(xué)PPT,2.,性狀：,白色或類白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。,在水中略溶，乙醇中微溶，三氯甲烷中幾乎不溶，在稀鹽
16、酸或氫氧化鈉溶液中溶解。,50,醫(yī)學(xué)PPT,3.,鑒別,（,1,）,+,溴，溴褪色；,+,氫氧化鋇，紫色,（,2,）,三,氧化鉻的飽和硫酸溶液，均勻涂于管壁,本品，不能再均勻涂于管壁,（,3,）,max=265nm,min=232nm,（,4,）,IR,51,醫(yī)學(xué)PPT,4.,檢查：,氯化物,硫酸鹽,含氟量,干燥失重,重金屬,52,醫(yī)學(xué)PPT,5.,含量測定：,取本品適量，加,0.1mol/L,鹽酸溶液制成每,1mL,中約含,10g,的溶液，照紫外,-,可見分光光度法，在,265nm,波長處，測定吸光度，按,C,4,H,3,FN,2,O,2,的吸收系數(shù)（,E,1%,1cm,）為,552,計(jì)算，
17、即得。,53,醫(yī)學(xué)PPT,54,醫(yī)學(xué)PPT,用途：,本品為嘧啶類的氟化物，屬于抗代,謝抗腫瘤藥，能抑制胸腺嘧啶核苷酸合成,酶，阻斷脫氧嘧啶核苷酸轉(zhuǎn)換成胸腺嘧啶,核苷核，干擾,DNA,合成。對,RNA,的合成也有,一定的抑制作用。,55,醫(yī)學(xué)PPT,不良反應(yīng)：,骨髓抑制：主要為白細(xì)胞減少、血小板下降。,食欲不振、惡心、嘔吐、口腔炎、胃炎、腹痛及腹瀉等胃腸道反應(yīng)。,注射局部有疼痛、靜脈炎或動脈內(nèi)膜炎。,其他：常有脫發(fā)、紅斑性皮炎、皮膚色素沉著手足綜合征及暫時(shí)性小腦運(yùn)動失調(diào)，偶有影響心臟功能,56,醫(yī)學(xué)PPT,注意事項(xiàng)：,用藥期間應(yīng)嚴(yán)格檢查血象。避光置陰暗處保存，溫度不應(yīng)低于,10,，亦不宜超過,35,。治療期涂藥范圍有炎癥，,停藥后炎癥消退。本品可引起嚴(yán)重的皮膚刺激，尤其在日光下。,該藥還可經(jīng)皮損內(nèi)注射給藥用于角化棘皮病、疣和汗孔角化病。其主要副作用為注射期間有的燒感，繼之有局部紅斑、水腫甚至潰瘍。,57,醫(yī)學(xué)PPT,第四節(jié) 反義寡核苷酸藥物分析,1.,定義,2.,化學(xué)修飾：硫代修飾,3.,序列分析：化學(xué)測序法；質(zhì)譜法,4.,雜交性質(zhì),5.,理化特性分析,（鑒別：,HPLC,，,CE,）,（特殊雜質(zhì)：失敗序列；硫代不充分）,6.,生物活性測定,58,醫(yī)學(xué)PPT,
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